Сегодня гематологический автоматический анализатор является неотъемлемой частью современной клинико-диагностической лаборатории. Появление этих приборов произвело по истине революционные изменения в практике анализа клеточного состава крови. Появление гематологического анализатора приводит к заметному изменению статуса КДЛ в лечебном учреждении, стимулирует интерес к работе у сотрудников лаборатории и повышает престиж медицинского учреждения в целом. Всего 10-15 лет назад клинические лаборатории были рады любому прибору позволяющему автоматизировать труд, повысить точность и производительность работы лаборантов.

Определение количества лейкоцитов, эритроцитов, показателей гематокрита и концентрации гемоглобина – этот комплекс чаще всего проводимых в лаборатории анализов известен под названием гемограммы. Для выполнения этого анализа автоматически с расширенными диагностическими возможностями используют гематологических анализаторы, которые позволяют очень быстро произвести следующее:

1. оценку состояния гемопоэза

2. диагностику и дифференциальная диагностика анемий

3. диагностику воспалительных заболеваний

4. оценку эффективности проводимой терапии

5. мониторинг за мобилизацией стволовых клеток из костного мозга.

Для качественной интерпретации анализа, выполненного автоматически, мы получаем одновременно с измеряемыми параметрами расчетные показатели. Автоматизация в гематологии предлагает новый подход к дифференцированию лейкоцитов. В зависимости от используемого метода достигается трехкомпонентное, пятикомпонентное или шестикомпонентное разделение лейкоцитов.

Гематологические анализаторы имеют систему обозначения – флаги или "сигналы тревоги" – указывающую на отклонение параметров от установленных границ. Они могут касаться как увеличения или уменьшения количества тех или иных клеток, так и изменения их функционального состояния, которое отражается на характеристиках измеряемых прибором клеток. Во всех этих случаях необходим строгий визуальный контроль окрашенных препаратов с соответствующими комментариями. Несмотря на все достоинства, даже самые современные гематологические анализаторы обладают некоторыми ограничениями, которые касаются точной морфологической оценки патологических клеток (например, при лейкозах), и не в состоянии полностью заменить световую микроскопию.

Благодаря высокой производительности анализатора врач получает результат по 10-40 показателям в течение 1 минуты, что абсолютно не достижимо при выполнении исследований ручными методами. На основе анализа тысяч клеток гематологические анализаторы способны представлять данные в виде гистограмм – распределений клеток по размерам. Большинство анализаторов представляет в виде гистограмм распределения по размерам тромбоцитов, эритроцитов и лейкоцитов. На распечатках результатов помещаются комментарии, интерпретирующие результат и описывающие возможную патологию, как например: анизоцитоз, микроцитоз, лейкоцитоз, лейкопения и т.д. При выполнении исследований “вручную” сохраняется вероятность ошибок, суммарная погрешность которых существенно зависит от навыков лаборанта и от его прилежности, и может превышать 15-20 %. Современные анализаторы выполняют измерения с погрешностью 1-3%. Кроме того, высокая точность и аналитические возможности гематологического анализатора позволяют мгновенно определять ряд новых весьма важных параметров, существенно повышающих диагностическую значимость анализа.

При использовании автоматического анализатора мы имеем огромные преимущества для проведения исследований гемограммы:

1. высокая производительность (60 и более пациентов в час))

2. небольшой объем крови (10-100 мкл)

3. анализ большого количества клеток (десятки тысяч)

4. высокая точность и воспроизводимость

5. оценка 18-32 параметров одновременно

6. мгновенная обработка расчетных параметров клеток

7. графическое представление результатов в виде гистограмм и скатерограмм

8. дополнительные возможности (автоматическая система КК, вывод на внешний ПК, штрих-код и пр.)

Все эти достоинства автоматического замера крови имеют значение только при строгом соблюдении комплексных мер по проведению преаналитического этапа и глубоком знании аналитических ошибок, возможных при автоматическом исследовании материала, а также умении специалиста прочитать полученный результат и дифференцировать истинное значение от погрешности в работе.

В настоящее время на рынок выходит современнейшее оборудование, разработанное уже в новом тысячелетии на базе новейших технологий и открытий. Такие анализаторы прекрасно исследуют кровь, как венозную, так и капиллярную, в потоке. Одними из таких приборов являются л гематологические анализаторы: Mythic-18, Mythic-22, Mythic-22ALL “ORPHEE” (Швейцария). Данные анализаторы прекрасно показали себя в работе с любым материалом, как с венозной, так и капиллярной кровью (даже материалом из пуповины) в различных диагностических лабораториях. В данных анализаторах максимально сочетаются все вышеперечисленные достоинства, преимущества и аналитические возможности автоматического гематологического замера крови.

Но каким бы технически совершенным не был прибор, мы постоянно возвращаемся к вопросам, связанным с преаналитическим периодом анализа. При получении результата на дисплее прибора и возникающих проблемах с интерпретационной осмысленностью полученного, приходится искать причины именно в доинструментальном периоде. Как правило, поиск причины тех или иных аналитических искажений приводит как раз в вышеуказанный период. Поэтому приходиться вновь и вновь возвращаться к этим вопросам.

Анализ гемограммы начинается с момента взятия крови. И здесь большое значение имеет коллективный подход и грамотность всей цепочки персонала, чья работа касается клинического анализа крови пациента. На точность и правильность результатов оказывает влияние техника взятия крови, используемые при этом инструменты (иглы, скарификаторы и др.), пробирки, в которые берется, а в последующем и хранится и транспортируется кровь, время исследования забранного материала.

Достоверность и точность гематологических исследований, проводимых на автоматическом анализаторе, во многом определяется техникой взятия крови. Кровь для клинического анализа берут у пациента из пальца, вены или из мочки уха, у новорожденных – из пятки.

Венозная кровь считается лучшим материалом для автоматического исследования крови. При известной стандартизации процессов взятия, хранения, транспортировки крови удается добиться минимальной травматизации и активации клеток, примеси тканевой жидкости, при этом всегда имеется возможность повторить и/или расширить анализ, например, добавив исследование ретикулоцитов. Необходимо использовать только марлевые или специальные безворсовые салфетки, смоченные 70% спиртом, и подождать до полного высыхания антисептика (30–60 секунд). Применение ватных тампонов и других волокнистых материалов подобного рода может привести к засорению волокнами счетной и гемоглобиновой камер, что влечет снижение точности и воспроизводимости измерения. Не рекомендуется использовать 96% спирт, так как он дубит кожу, поры кожи закрываются, и стерилизация может быть неполной. Не рекомендуется вытирать и обдувать место прокола, пальпировать вену после обработки.

Но есть пациенты и даже полностью профильные подразделения ЛПУ, в которых нет возможности использовать для исследования венозную кровь. Это детские поликлиники, дошкольные учреждения, новорожденные, ожоговые больные, больные с выраженным ожирением, со склонностью к венозному тромбозу и др. При заборе капиллярной крови перед проколом кожа пальца пациента обрабатывается стерильным тампоном, смоченным 70% спиртом. Кожа в месте прокола должна быть сухой, розовой и теплой. Место пункции необходимо просушить естественным способом для удаления остатков спирта, поскольку он может вызвать гемолиз.

Конечно, преаналитический этап работы с капиллярной кровью требует большей тщательности от персонала, но, учитывая, что из пальца кровь берут сами лаборанты, это практически исключает возможных погрешностей на данном этапе анализа. Кровь для гематологических исследований должна поступать свободным током непосредственно в пробирку, содержащую антикоагулянт ЭДТА. Взятие крови шприцом без антикоагулянта с последующимпереливанием в пробирку крайне нежелательно из-за формирования микросгустков и гемолиза. При взятии капиллярной крови необходимо использовать специальные пробирки с ЭДТА для капиллярной крови. Первую каплю крови, полученную после прокола кожи, следует удалить тампоном, поскольку эта капля содержит примесь тканевой жидкости. Капли крови должны свободно вытекать, нельзя давить на палец и массировать зону вокруг прокола, так как при этом в кровь попадает тканевая жидкость, что существенно искажает результаты исследования.

Необходимым условием для обеспечения качественной пробы является ее обязательное немедленное перемешивание с антикоагулянтом осторожным переворачиванием пробирки до 10 раз. В случае последовательного взятия капиллярной крови в несколько микропробирок необходимо соблюдать определенный порядок их заполнения. Последовательность взятия крови такова: в первую очередь заполняются пробирки с ЭДТА, затем с другими реактивами и в последнюю очередь заполняются пробирки для исследования сыворотки крови.

Основные рекомендации при работе с капиллярной кровью:

- При взятии крови в пробирку с антикоагулянтом не допускается стекание крови по коже пальца, стенке пробирки и любой другой поверхности, так как мгновенно происходит контактная активация прогресса свертывания.

- Кровь самотеком из прокола должна попадать прямо в антикоагулянт, перемешиваясь с ним.

- Нельзя выдавливать кровь из пальца во избежание спонтанной агрегации тромбоцитов и попадания в пробу большого количества межтканевой жидкости (тканевого тромбопластина).

- Строго соблюдать объем взятой крови в соотношении с ЭДТА

- Капиллярную кровь с ЭДТА следует хранить при комнатной температуре и анализировать в течение 4 часов после взятия.

Для обеспечения качественного результата исследований нужно четко контролировать время и условия хранения проб до выполнения анализа. Непосредственно после взятия крови исключается возможность спонтанной агрегации тромбоцитов, примерно 25 мин. необходимо для адаптации тромбоцитов к антикоагулянту. При анализе, проведенном позже, чем через 6-8 часов после взятия образца, уменьшается достоверность результатов. Более продолжительное хранение крови не рекомендуется, т.к. изменяются некоторые характеристики клеток (сопротивляемость клеточной мембраны), снижается объем лейкоцитов, повышается объем эритроцитов, что в конечном итоге приводит к ошибочным результатам измерения и неправильной интерпретации результатов. Только концентрация гемоглобина и количество тромбоцитов остаются стабильными в течение суток хранения крови. Кровь нельзя замораживать. При необходимости проведения отсроченного анализа (транспортировка на отдаленные расстояния, техническая неполадка прибора и т.д.) пробы крови хранят в холодильнике (+4 +8С) и исследуют в течение 24 часов. Однако при этом следует учитывать, что происходит набухание клеток и изменение параметров, связанных с их объемом. У практически здоровых людей эти изменения не носят критического характера и не сказываются на количественных параметрах, но при наличии патологических клеток последние могут изменяться или даже разрушаться в течение нескольких часов с момента взятия крови. Непосредственно перед исследованием кровь должна быть тщательно перемешана в течение нескольких минут для разведения антикоагулянта и равномерного распределения форменных элементов в плазме. Длительное постоянное перемешивание образцов на ротомиксе до момента их исследований не рекомендуется вследствие возможного травмирования и распада патологических клеток. Исследование крови на приборе проводится при комнатной температуре. Кровь, хранившуюся в холодильнике, необходимо вначале согреть до комнатной температуры, так как при низкой температуре увеличивается вязкость, а форменные элементы имеют тенденцию к склеиванию, что, в свою очередь, приводит к нарушению перемешивания и неполному лизису. Исследование холодной крови может быть причиной появления "сигналов" вследствие компрессии лейкоцитарной гистограммы. Приготовление мазков крови рекомендуется делать не позднее 1-2 часов после взятия крови.

При выполнении гематологических исследований на значительном удалении от места взятия крови неизбежно возникают проблемы, связанные с неблагоприятными условиями транспортировки. Тряска, вибрация, постоянное перемешивание, нарушения температурного режима, возможные проливы и загрязнения проб могут оказывать существенное влияние на качество анализов.

В заключение хотелось бы еще раз подчеркнуть, что современный гематологический анализатор яв¬ляется техническим устройством, которое обеспечивает выполнение аналитического процесса. Но обеспечение правильной подготовки крови и грамотное считывание результата с учетом всех компонентов, выданных прибором, проводится специалистами лаборатории. И это является не только залогом качества исследования, но и продолжительности бесперебойной работы автоматической аналитической системы.